2.2 不同中性蛋白酶對豆粕中抗原蛋白降解效果的比較

利用不同中性蛋白酶對豆粕進行處理，通過對其產物進行蛋白質電泳檢測各中性蛋白酶對豆粕中兩類抗原蛋白的降解效果，結果如圖2所示，在實驗設定條件下(試驗方法1.2.2)，各中性蛋白酶酶制劑對豆粕的抗原蛋白降解程度具有差異，5號中性蛋白酶在此條件下對抗原蛋白降解效率較高，其工作濃度為0.2%(m/m)。

2.3 不同蛋白酶配比劑量對豆粕抗原蛋白降解程度的比較

將上文挑選出的兩種蛋白酶按照如圖 3 所示的質量比例進行混合，在微生物存在條件下（試驗方法1.2.3，GJ25 及 BS01 在達到菌液濃度要求后,每 100 g豆粕添加1 ml菌液）發酵48 h后提取蛋白質進行電泳檢測，結果如圖3。

通過膠圖分析軟件UVP-VisionWorks對圖3(a)中大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的條帶進行定量分析，并將未經處理的豆粕對照樣品中的對應條帶設定為100%，計算其他各試驗組相關條帶的相對含量，得到圖3(b)的結果。結果顯示，酸性蛋白酶與中性蛋白酶的混合作用可降解豆粕中大于60%的兩類抗營養因子。其中，酸性蛋白酶與中性蛋白酶的比例在1：1至1：5內降解效果達到最優，最終確定比例為1：1時較為合理，兩者工作濃度均為0.2%。

2.4 發酵時間的確定

利用 5 號酸性蛋白酶與 5 號中性蛋白酶 1：1 配比的酶制劑，在微生物存在條件下（試驗方法1.2.4）對豆粕進行處理，在72 h內不同時間點采集樣品并進行對應的電泳檢測，結果如圖4。

圖4可見，豆粕中兩種抗營養因子的降解效果隨時間增長而提高，在 48 h時達到最高，與 72 h發酵效果無明顯差異，因此選定利用上文所述兩種酶制劑1 ：1配比的菌酶協同發酵時間為48 h。

2.5 發酵效果評價

依據上述結果，參考本試驗所用條件（試驗方法1.2.3 及 1.2.4）最終確定了發酵條件為：5 號酸性蛋白酶0.2%，5號中性蛋白酶0.2%，1%（v/m）枯草芽孢桿菌BS01（菌液濃度為1×106 CFU/ml），1%（v/m）植物乳桿菌 GJ25（菌液濃度為 1×109 CFU/ml），發酵時間 48 h。對在該條件下得到的發酵豆粕進行部分指標測定，結果如表1所示。

表1結果表明，本文確定的發酵劑及發酵條件下，發酵豆粕的粗蛋白及其中酸溶蛋白含量較高，提示其營養價值高。大豆球蛋白含量較低，提示該產品對豆粕中抗營養因子降解效果較好。產品pH值較低，乳酸含量較高可幫助維持動物腸道環境。另外，該產品還對水蘇糖和棉籽糖兩類抗營養因子降解效果明顯。

3、討論

發酵豆粕是解決豆粕在動物飼喂過程中消化利用率低下的重要手段之一，生產發酵豆粕需要根據原料特點選擇適合的條件及發酵劑。目前發酵豆粕生產所采用的發酵劑包含酶制劑和微生物。其中針對蛋白質降解起主要作用的是蛋白酶制劑。目前市

場上酶制劑種類繁多，但是大部分酶制劑的最適條件與實際生產條件存在差異。在對酶制劑進行選擇的時候不能僅憑酶活力大小作為判斷依據，而應重點關注針對目標底物的特異性效果。

本試驗針對降解豆粕中主要的抗營養因子大豆球蛋白及 β-伴大豆球蛋白這一目的，從挑選在非最適條件下適于降解豆粕的酶制劑入手，通過調整菌劑及酶制劑的配比，實現了較小成本下生產具有較高品質的發酵豆粕。依據蛋白酶制劑的國家標準（GB/T23527—2009），固體蛋白酶產品的活力單位定義為：1 g固體酶粉，在一定溫度和pH值條件下，1 min水解酪蛋白產生 1 μg 酪氨酸，即為一個酶活力單位，以U/g 表示。在發酵豆粕生產過程中，為保證益生菌的增殖及活性，其發酵過程中的溫度變化及 pH 值變化很難保證蛋白酶處在其最適條件。因此酶制劑產品所標示的酶制劑活力并不能反映出其對不同底物如豆粕中大豆蛋白的降解程度。本研究結果表明，不同來源的酶制劑在酪蛋白水解能力一致的條件下，針對特定原料豆粕的降解效果存在差異。同時中性蛋白酶對豆粕的降解起到更主要的作用，這一結果也同前人研究結果一致，綜合考慮成本因素和豆粕降解效果，本研究最終確定了上述酶制劑配比比例及發酵條件。需要說明的是，由于是隨機盲選，酸性蛋白酶和中性蛋白酶的最優組編號均為 5號，但是兩者并不來自同一廠家。另外，本試驗所用豆粕均為自然顆粒大小，沒有經過粉碎處理，也沒有滅菌處理，這些條件也是考慮到目前大部分發酵豆粕生產廠家的實際情況，盡量簡化發酵的條件控制，具體發酵條件在實際生產中也可根據實際情況進行微調。同時，本研究針對特定原料進行酶制劑篩選的思路和方法，也為實際生產中如何選擇合適的發酵劑產品提供了新的參考方案。

4、結論

本研究通過對酶制劑及酶制劑配比進行篩選，確定了菌酶協同發酵中一套最適的發酵條件，適合發酵豆粕生產。得到的發酵豆粕產品中，粗蛋白含量50.86%，酸溶蛋白 14.76%，大豆球蛋白 25.3 mg/g，pH 值 4.5，乳酸含量 2.76%，水蘇糖含量 0.017%，棉籽糖含量 0.082%。該產品抗營養因子低、乳酸含量高，是有益動物腸道健康的發酵豆粕產品，并能較大程度節約成本。

豆粕發酵方法

1.準備優質豆粕1噸、99多功能飼料發酵劑1-2包（500克，市場售價25元左右，第一次制作和低溫季節使用量大）、多糖性復合菌種培養基5公斤。

2.先將多糖性復合菌種營養基融入低于45℃的溫水中再加入99多功能飼料發酵劑發酵劑，2小時以上后再與上述其它物料混合均勻后將含水量調節到50%-60%（手捏一把成團且沒有水滴下為宜），本方法也用于發酵菜粕、棉粕脫毒代替豆粕。

3.最后壓實密封裝袋發酵7-10天即可打開使用，打開使用時切記要重新密封好，防止雜菌進入造成發霉。

密封發酵中的豆粕

多糖性復合菌種營養基產品說明書

本產品是針對復合微生物制劑產品（益生菌、菌種）進行激活、擴培、發酵等針對性設計的專用營養包（培養基），以菌種更喜歡的“食物”高濃度糖蜜為主要原料，再科學地添加氮源等原料，形成菌種“食物的全價飼料”，讓激活、培養、擴培的菌種更健壯與密度更大，讓發酵飼料效果與質量更好，讓直接添加的益生菌產生效果更快更好。且運用成本低廉，本品1公斤使用效果多項指標比添加3公斤紅糖、葡萄糖、白糖效果更好。在制作發酵飼料時本品1公斤可以直接代替20公斤左右的玉米粉等且在許多參數上發酵效果更好更快更香醇。

本產品符合飼料衛生標準

【適用對象】畜禽、水產養殖，環保

【原料組成】多糖性糖蜜、植物性蛋白胨、酵母膏、微量元素、維生素等。

【產品成分分析保證值】本品為黏稠液體，總糖分（蔗糖分+還原糖分）≥48%。 

【產品特點】

1.本品為運用在畜禽與水產養殖上、環保上經常使用的復合微生物（菌種）生長、繁殖、代謝的混合養料，含有微生物（菌種）所必需的碳源、氮源、微量元素、生長素等。

2.本品運用高濃度甘蔗糖蜜為主要原料，輔以低聚糖（益生元）等復合菌種所需的營養而設計，因此制作出的菌種健壯與密度更大、發酵飼料等氣味甜香濃郁，對飼養動物而言適口性更好。

【產品使用方法】

一、制作加強型EM菌液上的使用

將本品先溶于5倍以上的溫水中（溫度不超過45℃），再另外添加菌種和實際用水量（按照EM菌種的產品說明書），按照本品1公斤代替約3公斤紅糖的使用量，當然也可以少量另外添加少量紅糖或者適當增加本品的使用量效果更好。

二、激活多種復合菌種的使用方法

將本品溶于少量低于45℃的溫水中后再放入需要激活的菌種，然后再加入適量的水。適當增加本品的使用量會增加菌種的健壯程度與密度，且保存的時間也可以更長。本品1公斤可以兌水50公斤以上適合激活各種需要激活的復合菌種，廣泛運用包括糞污處理菌種激活、環保處理菌種激活、動物飲水復合益生菌激活后使用等運用上。

三、發酵飼料制作上的使用

先將本品融入低于45℃的溫水中再加入發酵劑，2小時以上后再與飼料混合，能夠大幅度提高發酵飼料的速度、質量、營養和適口性（包括青貯飼料），每噸發酵飼料添加本品推薦在750克以上，原則上本品使用量越大效果越好。本品1公斤可以代替20公斤左右的玉米粉制作發酵飼料且發酵效果更好更快更香醇（包括青貯飼料），運用本品后可以減少或不使用玉米粉，顯著降低發酵飼料制作成本。

四、配合畜禽、水產養殖益生菌使用

先將本品融入低于45℃的溫水中，再將運用在畜禽與水產養殖上的益生菌（不管是水劑還是粉劑）溶于其中2小時以上進行活化再使用（直接拌料或者飲水中添加），將可以明顯提高使用效果。使用量按照每噸飼料或飲水使用本品200克以上進行，活化后要求在72小時內使用完。此項操作也適合動物因為換欄等因素導致的應激，能夠讓動物快速恢復食欲，減少腸道健康等問題。

五、改善草料、青料等適口性

稀釋后（至少30倍）灑入一些動物飼料上（如草料、青綠飼料、適口性差的飼料等）能夠明顯改善采食量，提高營養和吸收等，稀釋時加入對應動物的益生菌效果更好。

六、其它方面的使用

在畜禽與水產養殖上，可以將本品作為特殊的甜味劑，改善因為添加某些藥物導致適口性差動物不吃的問題；直接將本品溶解稀釋后灑入水產養殖水域能夠促進微生物繁殖；灑入糞污處理中能夠促進發酵等；灑入采用微生物處理的污水中能夠加快處理速度等效果。

發酵豆粕的好處

1. 發酵豆粕徹底去除了大豆抗原和抗營養因子，解決幼齡動物的營養性腹瀉問題；
2. 低溫烘干或直接飼喂的濕潤狀態的發酵豆粕具有乳酸菌等益生菌功能，顯著提高動物的健康水平，減少畜禽舍氨味臭味，提高飼料報酬；
3. 具有酸化劑的功能，可酸化腸道，激活幼齡動物消化酶活性，抑制有害細菌；
4. 含較高的活性小肽，可以通過腸道粘膜直接吸收，吸收耗能低，并顯著提高植物蛋白的利用率；
5. 發酵后的豆粕適口性好，提高動物食欲，促進消化吸收，增進健康水平。

使用對象及用法用量

添加比例可以依據飼養對象、飼養階段和生理狀態的不同需求（泌乳，抗應激，促生長等），決定使用量：

1、全部替代乳清粉、代乳粉；

2、全部替代魚粉，且無組胺、無肌胃糜爛素；無高酸價；無高過氧比值；

3、全部取代腸膜蛋白粉及40%的血漿蛋白粉，且無病菌污染的危險；

4、優于豆粕等所有的植物性蛋白源。

動物用量：乳豬10%-25%；中大豬5%-8%；種蛋禽10%-20%；淡水魚5%-15%；仔豬5%-15%；哺乳母豬5%-10%；肉小禽5%-10%；鱖鱉海水魚10%-20%；懷孕母豬5%-8%；牛羊5%-15%；蝦蟹鰻10%-25%。

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綜上所述，發酵豆粕作為一種優質的植物蛋白質飼料，可改善大豆的營養品質，降低抗營養因子和抗原蛋白的水平，且富含生物活性物質，具有促進生長、增強免疫力和抑制消化道疾病、減少抗生素用量等功能，這對斷奶仔豬而言十分重要，并有利于豆粕的高效利用，對緩解我國優質蛋白質飼料的不足、減少對動物蛋白質飼料的依賴及降低生產成本等具有重要意義。

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